TÉCNICAS DE EDICIÓN GENÓMICA EN SÍNDROME DE LOEFFLER

El tratamiento para las infecciones por nematodos se limitan a un pequeño número de medicamentos antihelmínticos, y la rápida expansión de la administración de fármacos,plantea preocupaciones sobre la resistencia al fármaco. CRISPR / Cas9 en filarias y otras especies de nematodos parásitos se puede usar para validar objetivos de drogas y vacunas, probar directamente los alelos que confieren resistencia antihelmíntica e incluso potencialmente para diseñar parásitos no patógenos para la protección contra una infección posterior o para su uso en helmintos.

Referencia Bibliográfica : 

Zamanian, M., & Andersen, E. C. (2016). Prospects and challenges of CRISPR/Cas genome editing for the study and control of neglected vector-borne nematode diseases. The FEBS Journal, 283(17), 32043221.doi:10.1111/febs.13781     https://sci-hub.tw/10.1111/febs.13781

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TERAPIA CELULAR PARA SÍNDROME DE LOEFFLER

El trasplante alogénico de células madre hematopoyéticas es un tratamiento curativo para pacientes con enfermedades hematológicas de alto riesgo. Sin embargo, la neumonitis intersticial (IP) y otras toxicidades siguen siendo las principales preocupaciones después de la irradiación total del cuerpo (TBI). A partir de células madres mesénquimas hematopoyéticas se logró disminuir este problema. Se utilizaron aceleradores lineales como alternativa a la terapia de cobalto-60 tradicional con técnica de protección pulmonar. Se administró TBI como Co-TBI y IM-TBI de los cuales los pacientes que fueron tratados con IM-TBI presentaron menos neumonitis intersticial.

Referencia Bibliografica :

Chiang, Y., Tsai, C.-H., Kuo, S.-H., Liu, C.-Y., Yao, M., Li, C.-C., … Chen, Y.-H. (2016). Reduced incidence of interstitial pneumonitis after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation using a modified technique of total body irradiation. Scientific Reports, 6(1). doi:10.1038/srep36730

https://sci-hub.tw/10.1038/srep36730

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EJEMPLO DE TRANSGÉNICO ANIMAL EN SÍNDROME DE LOEFFLER

Los eosinófilos son importantes en la lucha contra parásitos como los helmintos, es su papel inflamatorio patógeno que tiene implicaciones significativas para la salud humana en el mundo desarrollado. Los ratones transgénicos que expresan de manera constitutiva la IL-5 (IL5T [IL-5 transgénica]: la IL-5 es producida por las células T, bajo el control del promotor CD2) tienen una eosinofilia extrema y permanente, donde los eosinófilos constituyen la mitad de todos los leucocitos. IL-5 actúa en múltiples niveles a lo largo del linaje de eosinófilos, regulando la producción, activación, migración y supervivencia de los eosinófilos.

Transgénicos

Ventajas 

1. Crear proteínas farmacéuticas, sobre todo anticuerpos destinados al tratamiento de infecciones o proteínas para elaborar vacunas contra virus y bacteriaspatógenas

2. Disminuir carencias o déficits nutricionales en ciertas poblaciones

3. Mejora de la calidad de los alimentos

4. Adaptación de órganos y células animales para humanos

5. Generación de modelos animales para estudios biomédicos

Desventajas 

1. Reacciones inmunitarias adversas causadas por vectores genéticamente transferidos al organismo humano

2. Se utilizan genes de resistencia a antibióticos lo que dificultaría el tratamiento de las enfermedades

3. La manipulación de los genes de un organismo altera las proteínas o cambia sus vías metabólicas

4. Alergias en los individuos que consuman el OMG

5. Pérdida de biodiversidad asociada al cultivo de transgénicos

Referencias Bibliográficas :

 1. Fairfax, K. A., Bolden, J. E., Robinson, A. J., Lucas, E. C., Baldwin, T. M., Ramsay, K. A., … de Graaf, C. A. Transcriptional profiling of eosinophil subsets in interleukin-5 transgenic mice. Journal of Leukocyte Biology . Publicado mayo  2018. Citado diciembre  2018. Disponible en: https://jlb.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/JLB.6MA1117-451R

2.Organización Mundial de la Salud. Frequently asked questions on genetically modified foods. Publicado mayo  2014. Citado diciembre  2018. Disponible en: http://www.who.int/foodsafety/areas_work/food-technology/Frequently_asked_questions_on_gm_foods.pdf

3.Houdebine, L.-M. (2014). Impacts of genetically modified animals on the ecosystem and human activities. Global Bioethics, 25(1), 3–18. doi:10.1080/11287462.2014.894709 https://sci-hub.tw/10.1080/11287462.2014.894709

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ADN RECOMBINANTE

ADN recombinante en la naturaleza

Un ejemplo de ADN recombinante en la naturaleza es la Recombinación genética. La recombinación genética es un proceso mediante el cual se obtiene un nuevo genotipo a través del intercambio de material genético entre secuencias homólogas de DNA, los cuales tienen orígenes diferentes. Mediante la recombinación genética la información genética de dos genotipos puede ser agrupada en un nuevo genotipo. Es así que la recombinación genética es una forma efectiva a través de la cual se mantiene e incluso aumenta la variabilidad genética de una población.

ADN recombinante artificial en Síndrome de Loeffler

Se basa en la actual vacuna bivalente Human Hookworm Vaccine en desarrollo clínico y en última instancia agregaría un antígeno larvario de Ascaris lumbricoides y un antígeno Trichuris trichiura en estadio adulto. La selección final de antígeno aplicará un sistema de clasificación que incluye la evaluación de los rendimientos de expresión y la solubilidad, la viabilidad del desarrollo del proceso y la ausencia de IgE específica de antígeno circulante entre las poblaciones que viven en regiones endémicas de helmintos.

1. Entrecruzamiento cromosómico. National Human Genome Research Institute. (Internet). Publicado 2017. Citado junio 2018. Disponible en: https://www.genome.gov/glossarys/index.cfm?id=41

2.http://www.scielo.org.co/pdf/iat/v29n2/v29n2a07.pdf

3.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3934375/

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USO DE WESTERN BLOT EN SÍNDROME DE LOEFFLER

La infección por Ascaris lumbricoides es la geohelmintiasis de mayor importancia en zonas rurales, por su alta frecuencia y morbilidad. La infección estimula una respuesta de anticuerpos IgA, sin embargo se conoce poco sobre las proteínas responsables de la respuesta para este isotipo. La identificación de estas proteínas podría ayudar al diseño de pruebas para el diagnóstico y la detección en el medio ambiente o en individuos expuestos a este parásito. Nuestro trabajo se basó en identificar proteínas antigénicas en extractos y fracciones de A. lumbricoides para la respuesta especifica IgA en el suero de niños infectados.

Referencia Bibliográfica  : 

Cabrera Barroso José Leonardo, Jiménez Artigas Juan Carlos, Nuñez L, Pocaterra L, Rojas E, Hernán A. Evaluación inmunológica de extractos de Ascaris Lumbricoides para las inmunoglobulinas IgA en el suero de individuos infectados. Gen  [Internet]. 2014  Jun [citado  2018  Nov  19] ;  68( 2 ): 48-52. Disponible en: 

http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0016-35032014000200005

https://www.researchgate.net/publication/309527918_Production_of_IgA_antobodies_against_protein_components_of_eggs_from_Ascaris_lumbricoides_in_serum_of_infected_children

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PRUEBA DE PCR

Tema   : PCR cuantitativa y PCR digital para la detección de huevos de Áscaris Lumbricoides 

Objetivo: Desarrollar un método sensible para detección de huevos de Áscaris Lumbricoides mediante PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR) y PCR digital (dPCR).

Muestra biológica: heces con huevos de áscaris lumbricoides

Tipo de ácido nucleico: ADN de Áscaris Lumbricoides

Gen a amplificar: ITS-1 (localizada entre los genes de ARNr 18S y 5.8S) , con un tamaño de 89bp

Tipo de PCR:    qPCR: 40 ciclos: Desnaturalización: 95ºC por 10 minuto.

                                                       Anillamiento: 60ºC por 40 segundos

                                                       Extención: 95 ºC por 10 segundos

                         dPCR: 40 ciclos:  Desnaturalización: 95ºC por 10 minutos

                                                      Anillamiento: 60ºC por 2 minutos

                                                      Extención: 72 ºC por 2 minutos

Especificidad y sensibilidad analítica: No presenta

Referencia Bibliográfica :

Acosta Soto, L., Santísima-Trinidad, A. B., Bornay-Llinares, F. J., Martín González, M., Pascual Valero, J. A., & Ros Muñoz, M. (2017). Quantitative PCR and Digital PCR for Detection of Ascaris lumbricoides Eggs in Reclaimed Water. BioMed Research International, 2017, 1–9. doi:10.1155/2017/7515409

https://sci-hub.se/10.1155/2017/7515409

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PRUEBA DE TAMIZAJE Y CONFIRMATORIA PARA SÍNDROME DE LOEFFLER

PRUEBA DE TAMIZAJE 

Los geohelmintos son considerados un problema de salud pública, siendo una causa importante de morbilidad y mortalidad; a nivel de América latina se estima que el 30% de la población padece de geohelmintiasis. Con una sensibilidad del 84% la prueba de ELISA podría ser sugerida como método de tamizaje; su especificidad se ve afectada por probables reacciones cruzadas por otros helmintos. La provincia de Los Ríos presenta mayor prevalencia de ascariasis seguido por la provincia del Guayas, los factores ambientales y sociales influyen en el desarrollo de este parásito intestinal en la zona. La eficacia encontrada en esta prueba permite ser implementada para diagnóstico confiable y precoz de ascariasis humana.

PRUEBAS CONFIRMATORIAS 

Evaluación de la reactividad serológica para IgA específica al extracto de huevos de A. lumbricoides por Western blot  , las proteínas separadas mediante electroforesis fueron transferidas a membranas de nitrocelulosa a 180 miliamperios a temperatura ambiente , bloqueadas con PBS-leche descremada al 1% durante 1 hora a temperatura ambiente. El perfil de proteínas del extracto de huevos de A. lumbricoides en geles de poliacrilamida mostró siete bandas visibles con movilidad relativa de 102, 92, 85, 65, 50, 45 y 30 kDa respectivamente. Se detectaron en el extracto de A. lumbricoides un mínimo de 17 proteínas.

Referencias Bibliográficas :

1.Champutiz E. Inmunodiagnóstico de ascariasis humana mediante ELISA indirecto [Internet]. 2016 [Citado 4 de noviembre del 2018]. Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/310505120_Inmunodiagnostico_de_ascariasis_humana_mediante_ELISA_indirecto

2.Mayora S. Producción de anticuerpos IgA contra componentes proteicos del huevo de Ascaris lumbricoides en el suero de niños infectados [Internet]. 2016 [Citado 4 de noviembre del 2018]. Disponible en: http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1316-71382016000200003

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