domingo, 25 de noviembre de 2018

ADN RECOMBINANTE



ADN recombinante en la naturaleza


Un ejemplo de ADN recombinante en la naturaleza es la Recombinación genética. La recombinación genética es un proceso mediante el cual se obtiene un nuevo genotipo a través del intercambio de material genético entre secuencias homólogas de DNA, los cuales tienen orígenes diferentes. Mediante la recombinación genética la información genética de dos genotipos puede ser agrupada en un nuevo genotipo. Es así que la recombinación genética es una forma efectiva a través de la cual se mantiene e incluso aumenta la variabilidad genética de una población.

ADN recombinante artificial en Síndrome de Loeffler


Se basa en la actual vacuna bivalente Human Hookworm Vaccine en desarrollo clínico y en última instancia agregaría un antígeno larvario de Ascaris lumbricoides y un antígeno Trichuris trichiura en estadio adulto. La selección final de antígeno aplicará un sistema de clasificación que incluye la evaluación de los rendimientos de expresión y la solubilidad, la viabilidad del desarrollo del proceso y la ausencia de IgE específica de antígeno circulante entre las poblaciones que viven en regiones endémicas de helmintos.

1. Entrecruzamiento cromosómico. National Human Genome Research Institute. (Internet). Publicado 2017. Citado junio 2018. Disponible en: https://www.genome.gov/glossarys/index.cfm?id=41
2.http://www.scielo.org.co/pdf/iat/v29n2/v29n2a07.pdf
3.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3934375/

domingo, 18 de noviembre de 2018

USO DE WESTERN BLOT EN SÍNDROME DE LOEFFLER







La infección por Ascaris lumbricoides es la geohelmintiasis de mayor importancia en zonas rurales, por su alta frecuencia y morbilidad. La infección estimula una respuesta de anticuerpos IgA, sin embargo se conoce poco sobre las proteínas responsables de la respuesta para este isotipo. La identificación de estas proteínas podría ayudar al diseño de pruebas para el diagnóstico y la detección en el medio ambiente o en individuos expuestos a este parásito. Nuestro trabajo se basó en identificar proteínas antigénicas en extractos y fracciones de A. lumbricoides para la respuesta especifica IgA en el suero de niños infectados.


Referencia Bibliográfica  : 
Cabrera Barroso José Leonardo, Jiménez Artigas Juan Carlos, Nuñez L, Pocaterra L, Rojas E, Hernán A. Evaluación inmunológica de extractos de Ascaris Lumbricoides para las inmunoglobulinas IgA en el suero de individuos infectados. Gen  [Internet]. 2014  Jun [citado  2018  Nov  19] ;  68( 2 ): 48-52. Disponible en: 
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0016-35032014000200005



domingo, 11 de noviembre de 2018

PRUEBA DE PCR





Tema   : PCR cuantitativa y PCR digital para la detección de huevos de Áscaris Lumbricoides 
Objetivo: Desarrollar un método sensible para detección de huevos de Áscaris Lumbricoides mediante PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR) y PCR digital (dPCR).
Muestra biológica: heces con huevos de áscaris lumbricoides
Tipo de ácido nucleico: ADN de Áscaris Lumbricoides
Gen a amplificar: ITS-1 (localizada entre los genes de ARNr 18S y 5.8S) , con un tamaño de 89bp
Tipo de PCR:    qPCR: 40 ciclos: Desnaturalización: 95ºC por 10 minuto.
                                                       Anillamiento: 60ºC por 40 segundos
                                                       Extención: 95 ºC por 10 segundos
                         dPCR: 40 ciclos:  Desnaturalización: 95ºC por 10 minutos
                                                      Anillamiento: 60ºC por 2 minutos
                                                      Extención: 72 ºC por 2 minutos
Especificidad y sensibilidad analítica: No presenta
Referencia Bibliográfica :
Acosta Soto, L., Santísima-Trinidad, A. B., Bornay-Llinares, F. J., Martín González, M., Pascual Valero, J. A., & Ros Muñoz, M. (2017). Quantitative PCR and Digital PCR for Detection of Ascaris lumbricoides Eggs in Reclaimed Water. BioMed Research International, 2017, 1–9. doi:10.1155/2017/7515409



domingo, 4 de noviembre de 2018

PRUEBA DE TAMIZAJE Y CONFIRMATORIA PARA SÍNDROME DE LOEFFLER

PRUEBA DE TAMIZAJE 

Los geohelmintos son considerados un problema de salud pública, siendo una causa importante de morbilidad y mortalidad; a nivel de América latina se estima que el 30% de la población padece de geohelmintiasis. Con una sensibilidad del 84% la prueba de ELISA podría ser sugerida como método de tamizaje; su especificidad se ve afectada por probables reacciones cruzadas por otros helmintos. La provincia de Los Ríos presenta mayor prevalencia de ascariasis seguido por la provincia del Guayas, los factores ambientales y sociales influyen en el desarrollo de este parásito intestinal en la zona. La eficacia encontrada en esta prueba permite ser implementada para diagnóstico confiable y precoz de ascariasis humana.

PRUEBAS CONFIRMATORIAS 

Evaluación de la reactividad serológica para IgA específica al extracto de huevos de A. lumbricoides por Western blot  , las proteínas separadas mediante electroforesis fueron transferidas a membranas de nitrocelulosa a 180 miliamperios a temperatura ambiente , bloqueadas con PBS-leche descremada al 1% durante 1 hora a temperatura ambiente. El perfil de proteínas del extracto de huevos de A. lumbricoides en geles de poliacrilamida mostró siete bandas visibles con movilidad relativa de 102, 92, 85, 65, 50, 45 y 30 kDa respectivamente. Se detectaron en el extracto de A. lumbricoides un mínimo de 17 proteínas.


Referencias Bibliográficas :
1.Champutiz E. Inmunodiagnóstico de ascariasis humana mediante ELISA indirecto [Internet]. 2016 [Citado 4 de noviembre del 2018]. Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/310505120_Inmunodiagnostico_de_ascariasis_humana_mediante_ELISA_indirecto

2.Mayora S. Producción de anticuerpos IgA contra componentes proteicos del huevo de Ascaris lumbricoides en el suero de niños infectados [Internet]. 2016 [Citado 4 de noviembre del 2018]. Disponible en: http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1316-71382016000200003